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小球藻(Chlorella)是一种绿色单细胞藻类,含有丰富的蛋白质,可作为生物活性肽的良好材料。生物体内活性氧过多会发生氧化应激反应,导致细胞或组织损伤。正常情况下内源性抗氧化防御系统起主导作用,但外源性抗氧化剂对于维持氧化损伤和抗氧化防御之间的自由基稳态同样至关重要。本文以小球藻为原料,通过酶解法制备小球藻蛋白抗氧化肽,探讨了消化过程中小球藻蛋白抗氧化肽的结构特征变化(微观结构、二级此网站结构以及氨基酸含量)及抗氧化活性,并对其进行分离纯化鉴定。研究内容及结果如下:(1)采用水提醇沉法提取小球藻脱脂粗蛋白,筛选四种蛋白酶应用于小球藻脱脂粗蛋白的酶解反应,确定最佳水解酶为碱性蛋白酶。通过单因素和响应面实验优化小球藻脱脂粗蛋白的酶解条件,得到最佳工艺条件:酶解温度55℃,p H值8.75,酶底比2.15%,在此条件下得到的酶解产物DPPH、ABTS、羟自由基清除率和亚铁离子螯合率分别为53.19±0.99%、76.86±0.28%、53.39±1.74%、22.56±2.97%。(2)利用INFOGEST模型对不同分子量小球藻多肽M_3(>3 k Da)和L_3(<3k Da)进行体外模拟消化,M_3和L_3多肽在胃肠消化过程中呈现网状结构,并且在胃肠道酶诱导下二级结构以β-折叠为主,赖氨酸表现出较好的耐消化性。L_3在胃部表现出更强的抗氧化活性,对DPPH自由基清除能力、亚铁离子螯合能力分别达到64.29±2.97%、71.68±2.97%,经过胃肠阶段消化后,疏水性氨基酸大量释放导致L_3多肽抗氧化活性下降,但L_3始终高于M_3。因此,分子量更小的L_3多肽表现出更好的胃肠消化稳定性和抗氧化活性。(3)小球藻抗氧化肽经超滤、Sephadex G-15凝胶色谱层析分离纯化后,所得C1组分(4 NK cell biologymg/m L)对DPPH自由基清除能力、亚铁离子螯合能力分别为59.62±1.29%、49.78±1.55%。经LC-MS/MS鉴定得到152种肽序列,通过肽活性评分和自由基清除活性预测及分子对接进一步筛选,最终确定了6种肽序列,并预测了多肽的理化性质、毒性和致敏性等性质,其中多肽SGHHKPL具有良好的消化稳定性、无Proteasome抑制剂毒性且水溶性好,SLPGGYGL、WHMHKTF无毒性且致敏性小,有望成为安全有效的抗氧化剂。

目的:本研究对经外周置入中心静脉导管(Peripherally Inserted Central Catheter,PICC)冲封管相关指南的推荐意见进行一致性分析,并根据分析结果制定问卷,调查PICC冲封管相关指南临床应用情况及其应用的影响因素。本研究结果为制定促进指南临床应用的干预措施提供理论依据,同时为机构或政府制定及推行指南临床转化政策提供数据支撑和借鉴参考。方法:1.PICC冲封管推荐意见一致性分析:系统检索主要中外文数据库、指南网站、PICC协会/学会网站以及相关文献的参考文献获取PICC冲封管相关指南,使用指南研究与评价工具(Appraisal of Guidelines for Research and Evaluation II,AGREE II)、最佳推荐意见的质量评价工具(Appraisal of Guidelines Research and Evaluation Recommendations ExcelleWnt-C59浓度nce,AGREE REX)、临床实践指南报告工具(Reporting Items for Practice Guidelines in Healthcare,RIGHT)评价纳入指南。双人独立提取推荐意见后,对推荐意见的内容和推荐强度进行一致性分析。2.PICC冲封管相关指南临床应用的横断面调查:基于推荐意见一致性结果,采用专家函询构建PICC冲封管相关指南临床应用问卷。采用方便抽样抽取参与过或正在参与PICC护理的护士,使用PICC冲封管相关指南临床应用问卷和证据应用障碍因素和促进因素评定量表调查PICC冲封管相关指南临床应用现状,并通过单因素分析和多因素分析探索指南临床应用的影响因素。结果:1.PICC冲封管推荐意见一致性分析:(1)本研究共纳入46部PICC冲封管相关指南,其中39部报告了26种证据分级和推荐强度分级的组合。(2)纳入指南的RIGHT总报告率介于22.7%～91.4%,报告率最低的领域是“评审和质量保证”(41.3%),报告率最低的条目是“结局遴选和分类的方法”(10.9%)。46部指南的AGSediment ecotoxicologyREEⅡ整体得分为61.6%(IQR:51.5%～72.1%),其中中文指南的整体得分为53.3%(IQR:46.6%～60.7%),英文指南的整体得分为64.9%(IQR:59.1%～75.0%)。各领域得分中位数介于43.8%～94.4%,其中“应用性”得分最低,“表达的明晰性”得分最高。AGREE REX整体得分为62.1%(IQR:53.7%～72.2%),其中中文指南的整体得分为53.7%(IQR:51.4%～66.7%),英文指南的整体得分为65.8%(IQR:56.1%～73.6%)。得分最高的领域为“临床适用性”(77.8%),得分最低的领域为“价值观和偏好”(43.8%)。(3)46部指南共提取出39条主要推荐意见,其中3条推荐意见就是否推荐溶栓/纤溶药物、肝素稀释溶液作为冲封管液存在不一致。2.PICC冲封管相关指南临床应用的横断面调查:(1)基于指南一致性分析结果,经过两轮专家函询,制定PICC冲封管相关指南临床应用问卷,问卷内容效度为0.938,Cronbach’sα系数为0.725。本次调查共回收问卷801份,推荐意见的整体临床应用率为89.0%(IQR:64.5%～94.3%),6条推荐意见临床应用率不足50.0%。(2)证据应用障碍因素和促进因素量表总得分为147.2±18.9分,4个维度(实施情境、证据应用的组织形式、证据应用负责人、护士团队)条目平均得分超过3分。(3)t检验、方差分析和X~2检验表明不同科室、不同职务、不同职称、不同工作年限、不同学历之间的PICCZD1839冲封管相关指南临床应用得分存在统计学差异;参加过指南临床转化和应用的培训的护士、PICC专科护士的冲封管指南临床应用得分更高。Pearson相关分析和Spearman相关分析结果显示,维度二(证据应用的组织形式)得分与冲封管技术得分呈负相关,与冲封管时机、健康教育、评估与记录、质量控制、冲封管工具以及冲封管液容量得分呈正相关,其他5个维度(实施情境、证据应用负责人、证据、护士团队、患者)均与冲封管指南临床应用得分呈正相关。(4)多元线性回归与二元Logistics回归分析结果显示,PICC冲封管相关指南临床应用的障碍因素有“在现有的文献中,无法检索到需要的证据资源”和“患者对证据应用相关变革缺乏意识或态度消极”,促进因素有“以项目/课题的形式开展证据应用”、“涉及的学科团队了解循证知识”、“护士长积极推动证据应用在科室落地”、“护士具备扎实的临床专业知识”、“上级主管部门要求促进循证护理工作”、“证据应用负责人能根据PIPOST原则提出结构化的护理问题”以及由肿瘤科、内科、其他更高职务或至少11年的工作年限的护士进行PICC冲封管。结论:1.本研究共纳入46部PICC冲封管相关指南,纳入指南的方法学、报告以及推荐意见质量有限,中、英文指南间仍存在一定的差距。不同PICC冲封管相关指南的证据分级和推荐强度分级标准存在差异。对纳入指南推荐意见内容进行一致性分析发现,不同指南就冲封管液的推荐存在矛盾,其他的推荐意见内容一致,但是推荐强度不一致,且部分推荐意见存在内容缺乏具体实施细则的情况。2.本研究对36条一致性的PICC冲封管推荐意见临床应用情况的调查显示,指南整体临床应用率较高,但仍存在部分薄弱环节。PICC冲封管相关指南的临床应用受患者、指南、护士团队、证据的组织应用形式、证据应用负责人、实施情境的影响,研究者可以从这6个层面出发制定干预方案以促进PICC冲封管相关指南的临床应用。

单一的成像诊断与治疗均存在固有的缺陷和局限性,将多种成像技术或治疗方式相结合以获取更全面的病变信息或通过不同杀伤机制清除癌细胞是肿瘤精准诊断与高效治疗的有效手段。例如,将计算机断层扫描(CT)和磁共振(MR)成像相结合实施CT/MR双模态成像诊断,以及将化疗药物和具有治疗功能的纳米颗粒(如硒纳米颗粒)相结以调节不同的信号通路,克服肿瘤多药耐药性(MDR)协同高效杀伤肿瘤。其关键技术是构建合适的纳米载体将不同成像元素或抗癌药物整合在同一纳米平台,对其进行多功能化(靶向或肿瘤微环境响应性修饰等)后将成像剂或药物高效递送至肿瘤部位。尤其是,药物负载量高、易于负载多种药物和多功能化的纳米载体的构建依然是一个巨大的挑战。纳米水凝胶(NGs)是由高分子链通过物理或化学交联而成的三维网络结构材料,具有良好的亲水性、生物相容性、药物负载量和流变性,易于被肿瘤细胞吞噬。选择合适的主体高分子可使其兼具高分子和纳米凝胶双重载体负载药物特性(负载方式和负载容量),合理选择交联剂,如二硫键、二硒键等,赋予NGs肿瘤微环境(TME)的响应裂解能力,进而智能释放治疗药物,在肿瘤纳米药物领域具有广泛应用潜力。基于此,本论文以树状大分子或聚(N-乙烯基己内酰胺)为基体材料构建了两种NGs分别负载两种成像剂或治疗剂用于肿瘤双模态成像诊断和联合治疗。其主要内容如下:(1)多功能聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM)纳米凝胶平台的制备用于肿瘤CT/MR的双模态成像研究显示,PAMAM树状大分子具有内部空间、可控尺寸和外围大量官能团等独特物理化学性质,是一种优良的造影剂和治疗剂纳米载体。树状大分子纳米凝胶(DNGs)将综合树状大分子和NGs的载体优点,能高效负载和递送造影剂或治疗剂至肿瘤部位。在此,我们通过反相微乳液法合成DNGs,在其内部包裹金纳米颗粒(Au NPs),表面螯合钆复合物(Gd-DTPA)和修饰靶向试剂RGD与抗蛋白吸附试剂丙烷磺内酯(1,3-PS),得到R-G@ADP用于肿瘤CT/MR双模态成像。结果显示,R-G@ADP呈圆球形均匀分散,尺寸约为113.89 nm,具有优异的X-射线衰减特性、弛豫率和细胞相容性,易于被胰腺癌细胞(Panc-2)吞噬。在体外的Panc-2 3D细胞球模型显示R-G@MAPK抑制剂ADP比对照材料纳米颗粒G3@AGP具有更高的渗透性。体内实验结果表明,小鼠体内的CT/MR成selleck激酶抑制剂像RG@ADP在各个时间点的HU和SNR信号值均高于G3@AGP,提示R-G@ADP更容易在肿瘤部位聚集,从而提高其在肿瘤部位的CT/MR成像效果。(2)聚(N-乙烯基己内酰胺)纳米凝胶(PVCL NGs)structure-switching biosensors平台负载Se NPs与化疗药物甲氨蝶呤(MTX)用于肿瘤的治疗研究表明,PVCL NGs的合成工艺简单且产量可控,其表面物理化学性质易于调节,近年来作为智能型载体备受关注。此外,MDR常导致单一化疗疗效不理想,多种化疗药物联用或与其他治疗方式联合常用来增强化疗效果。基于此,我们通过沉淀聚合法制备PVCL NGs,以此负载治疗性硒纳米颗粒(Se NPs)和化疗药物MTX得到纳米药物(MTX/Se@PVCL NGs),用于黑色素瘤(B16)细胞的联合治疗。结果显示,MTX/Se@PVCL NGs呈圆球形均匀分散,尺寸约为105.30 nm。其中NGs中的MTX具有良好的GSH响应释放性能。体外细胞实验结果显示,MTX/Se@PVCL NGs可以显著提高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡。

目的:牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)是慢性牙周炎的主要致病菌,具有外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)等多种毒力因子。由于囊泡膜结构的保护,P.gingivalis OMVs可以避免被降解并实现长距离传递,比细菌具有更强的毒性。铁死亡是一种铁依赖性的细胞程序性死亡,在炎症性疾病的发生发展中起着至关重要的作用。近年来的研究表明,P.gingivalis与肠道系统疾病密切相关,但关于其OMVs诱导铁死亡并加重肠道炎症的报道较少。在本实验中,我们研究了P.gingivalis OMVs对肠上皮细胞炎症反应的影响,并探索铁死亡在肠上皮炎症中的致病作用及机理,为牙周炎与肠道炎症性疾病之间的关系提供新的依据,为肠道系统疾病的防治提供新思路。材料与方法:1、用超高速离心法结合超滤法提取P.gingivalis W83的OMVs,并测定其浓度,再用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和纳米粒径追踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)对其进行鉴定。2、P.gingivalis OMVs(10μg/m L)刺激人直肠腺癌细胞(Caco-2)12 h后用TEM观察其线粒体的形态变化。3、用quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-18和IL-1βmRNA的表达水平。4、P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,selleck激酶抑制剂用微量酶标法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量,使用亚铁嗪微板法检测Fe~(2+)的含量,用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,用微板法检测还原型谷胱Adavosertib分子式甘肽(glutathione,GSH)的含量。5、P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,用qRT-PCR、Western blot或免疫荧光检测储铁蛋白重链(ferritin heavy,FTH)、氧化型低密度脂蛋白受体1(oxidized low-density lipoprotein receptor 1,LOX-1)和铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis-suppressor-protein 1,FSP1)的mRNA或蛋白表达。6、使用铁死亡抑制剂Liproxstatin-1(1μmol/L)预处理12 h后,观察P.gingivalis OMVs刺激的Caco-2细胞线粒体形态的变化,检测IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β、FTH、LOX-1和FSP1的mRNA或蛋白表达水平以及Fe~(2+)、MDA和GSH的含量。7、本实验结果采用SPSS Statistics 25进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1、超高速离心法结合超滤法成功从P.gingivalis W83培养液中提取OMVs。2、TEM结果显示P.gingivalis OMVs诱导下的Caco-2细胞线粒体变小,膜密度增高,嵴数量减少。3、10μg/m L的P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞6 h和12 h后,炎症因子IL-6、TNF-α、IL-18和IL-1βmRNA的表达水平升高(P<0.05)。4、细胞毒性分析结果显示,P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞后,LDH含量显著增高,细胞损伤及死亡数量增加(P<0.05)。5、qRT-PCR及微板法结果显示,P.gingivalis OMVs刺激使Caco-2细胞的FTH mRNA的表达水平升高,MDA和Fe~(2+)含量升高,GSH含量降低(P<0.05)。6、在P.gingivalis OMVs刺激下,LOX-1的mRNA表达水平升高,FSP1的mRNA及蛋白表达下降,而LOXPredictive medicine-1的Western blot及免疫荧光结果均显示其蛋白表达水平下降(P<0.05)。7、在Liproxstatin-1的作用下,P.gingivalis OMVs刺激的Caco-2细胞线粒体形态改善,IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β和FTH mRNA的表达水平降低,LDH、MDA和Fe~(2+)含量降低,GSH含量增高,LOX-1的mRNA表达水平下降而蛋白水平上升,FSP1的mRNA及蛋白表达水平均上升(P<0.05)。结论:P.gingivalis OMVs通过诱导铁死亡而加重肠上皮细胞炎症反应。

随着对光催化技术的研究与发展,如何研究一种能够应用于光催化、光电化学、电催化领域的高效催化剂已然成为重点。相较于传统的金属氧化物和金属硫化物,金属硒化物由于具有获悉更多带隙窄、内阻低和比表面积大等特点被广泛研究。作为本文研究的重点,CuSe具有窄带隙和低内阻,在相关研究中Cuselleck NMRSe也在光催化降解、电催化、光电化学等方面表现出良好的性能。本研究创新点在于提出了构建新型的CuSe/Zn Se双异质结催化剂、CuSe/FeSe_2Z型异质结催化剂和具有多价态的Cu_(2-x)Se/FeSe_2Z型异质结催化剂,这些体系均未被研究并且本研究证明了这三种体系对提高光催化、光电化学以及电催化性能都具有各自的优势。这些体系首先采用了高效的2D/0D以及2D/1D等结构,二维材料对于作为基底结构十分合适,在其表面负载一维材料或者零维材料以构建异质结。这种结构增加两种材料的接触面积,更好地分离两种不同材料的光生电子和空穴,进一步提高载流子的传输效率。其次,选择能带匹配更为合适的材料以构建出更好的异质结类型。研究内容主要是以下三部分:(1)在二维CuSe纳米片的(001)面上负载零维Zn Se纳米颗粒,构建了2D/0D CuSe/Zn Se异质结催化剂。双异质结结构使得光生电子和空穴分离到不同的位置,以达到更高的载流子传输效率。实验结果表明,CuSe/Zn Se催化剂具有较高的光电化学和电催化性能,光催化降解性能也有所提高。在最优的负载比率下,异质结催化剂的电催化性能提升4.67倍,光电化学性能增强了7倍,对亚甲基蓝的降解速率提高了1.26倍。(2)在二维CuSe纳米片上负载一维FeSe_2纳米棒,以构建2D/1D CuSe/FeSe_2Z型异质结催化剂。多维结构能够增加接触面积进而加强载流子传输效率高,Z型异质结结构使空穴和电子能更好的进行分离,并且保留更高的氧化还原活性。在最佳复合比下,异质结催化剂的光电化学性能提高了4.99倍,对左氧氟沙星的降解速率提高了8.37倍,对亚甲基蓝的降解速率提高了6.06倍。(3)在一维FeSe_2纳米棒上负载零维Cu_(2-x)Se纳米颗粒,构建一种多价态Cu_(2-x)Se/FeSe_2Z型异质结催化剂。Z型异质结结构的形成提高了氧化还原能力,多价态异质结提高了催化活性,合适的多维结构提高了载流子传输能力。在最佳复合比下,其光催化和光电化学性能分别为单品Cu_(2-x)Se的1.34倍HBV infection和3.65倍,电催化性能提升1.35倍。对这三部分工作的各自优势进行简要的概述。首先,对于光催化降解性能CuSe/FeSe_2催化剂在三者之中更为优异。由于CuSe/FeSe_2催化剂形成了Z型异质结结构并且有超氧自由基的产生,载流子的传输效率进一步提升,并且超氧自由基的存在对于降解抗生素以及染料更为有效。其次,CuSe/Zn Se催化剂的电催化性能相比之下是最佳的。由于Zn Se纳米颗粒自身拥有较大的比表面积,与CuSe纳米片之间能够形成更紧密的接触,这就使得电子在催化剂中更易传输。此外,紧密的接触可以提供更多的活性位点,使得电阻显著减小,进而提高电催化性能。对于光电化学性能,三种催化剂都有不错的提升。异质结的形成能够显著提高光生载流子的分离效率。相对于CuSe,Cu_(2-x)Se具有较窄的带隙,出色的光吸收能力、良好的光稳定性以及较高的电导率。此外,由于Cu_(2-x)Se中的Cu含有多个价态Cu~(1+)、Cu~(2+),在光电化学反应中不同价态之间可能会发生转变,从而增加反应的可能性,致其光电化学性能相对更好。总的来说Cu_(2-x)Se/FeSe_2的光电化学性能的提升更为优越。

目的:牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)是慢性牙周炎的主要致病菌,具有外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)等多种毒力因子。由于囊泡膜结构的保护,P.gingivalis OMVs可以避免被降解并实现长距离传递,比细菌具有更强的毒性。铁死亡是一种铁依赖性的细胞程序性死亡,在炎症性疾病的发生发展中起着至关重要的作用。近年来的研究表明,P.gingivalis与肠道系统疾病密切相关,但关于其OMVs诱导铁死亡并加重肠道炎症的报道较少。在本实验中,我们研究了P.gingivalis OMVs对肠上皮细胞炎症反应的影响,并探索铁死亡在肠上皮炎症中的致病作用及机理,为牙周炎与肠道炎症性疾病之间的关系提供新的依据,为肠道系统疾病的防治提供新思路。材料与方法:1、用超高速离心法结合超滤法提取P.gingivalis W83的OMVs,并测定其浓度,再用透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和纳米粒径追踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)对其进行鉴定。2、P.gingivalis OMVs(10μg/m L)刺激人直肠腺癌细胞(Caco-2)12 h后用TEM观察其线粒体的形态变化。3、用quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-18和IL-1βmRNA的表达水平。4、P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,selleck激酶抑制剂用微量酶标法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量,使用亚铁嗪微板法检测Fe~(2+)的含量,用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,用微板法检测还原型谷胱Adavosertib分子式甘肽(glutathione,GSH)的含量。5、P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞0 h、6 h和12 h后,用qRT-PCR、Western blot或免疫荧光检测储铁蛋白重链(ferritin heavy,FTH)、氧化型低密度脂蛋白受体1(oxidized low-density lipoprotein receptor 1,LOX-1)和铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis-suppressor-protein 1,FSP1)的mRNA或蛋白表达。6、使用铁死亡抑制剂Liproxstatin-1(1μmol/L)预处理12 h后,观察P.gingivalis OMVs刺激的Caco-2细胞线粒体形态的变化,检测IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β、FTH、LOX-1和FSP1的mRNA或蛋白表达水平以及Fe~(2+)、MDA和GSH的含量。7、本实验结果采用SPSS Statistics 25进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1、超高速离心法结合超滤法成功从P.gingivalis W83培养液中提取OMVs。2、TEM结果显示P.gingivalis OMVs诱导下的Caco-2细胞线粒体变小,膜密度增高,嵴数量减少。3、10μg/m L的P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞6 h和12 h后,炎症因子IL-6、TNF-α、IL-18和IL-1βmRNA的表达水平升高(P<0.05)。4、细胞毒性分析结果显示,P.gingivalis OMVs刺激Caco-2细胞后,LDH含量显著增高,细胞损伤及死亡数量增加(P<0.05)。5、qRT-PCR及微板法结果显示,P.gingivalis OMVs刺激使Caco-2细胞的FTH mRNA的表达水平升高,MDA和Fe~(2+)含量升高,GSH含量降低(P<0.05)。6、在P.gingivalis OMVs刺激下,LOX-1的mRNA表达水平升高,FSP1的mRNA及蛋白表达下降,而LOXPredictive medicine-1的Western blot及免疫荧光结果均显示其蛋白表达水平下降(P<0.05)。7、在Liproxstatin-1的作用下,P.gingivalis OMVs刺激的Caco-2细胞线粒体形态改善,IL-6、TNF-α、IL-18、IL-1β和FTH mRNA的表达水平降低,LDH、MDA和Fe~(2+)含量降低,GSH含量增高,LOX-1的mRNA表达水平下降而蛋白水平上升,FSP1的mRNA及蛋白表达水平均上升(P<0.05)。结论:P.gingivalis OMVs通过诱导铁死亡而加重肠上皮细胞炎症反应。

目的 探究妊娠期高血压疾病治疗中低分子肝素的应用效果。方法 便利选取2021年4月—2022年5月淄博市妇幼保健院收治的62例妊娠期高血压患者作为研究对象，随机分为LSM组（31例）与DFZ组（31例），LSM组采用硫酸镁治疗，DFZ组采用低分子肝素治疗。比较两组患者end-to-end continuous bioprocessing的治疗效果、血压水平、临床指标（脐血流RI值、脐血流S/D值、血黏度、血细胞压积、心率、出血量、凝血酶原时间、D-二聚体）、不良反应发生率、不良妊娠结局发生率。结果 治疗前，两组患者血压水平及各项临床指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，DFZ组治疗效果、ABT-199供应商血压水平、临床指标均优于LSM组，不良反应发生率低于LSM组，差异有统计学意义（P<0.05）。DFZ组不良妊娠结局发生率6.45%(2/31)低于LSM组的29.03%(9/31)，差异有统计学意义（χ~2=5.415,P=0.020）。结论 在妊娠期高血压疾病治疗中实施低分子肝素干预可提高患者治疗效果，改善各项临床指标，减少不良反应发生率及不良妊Barasertib半抑制浓度娠结局发生率。

目的 探讨血管生成素(ANG)及其突变体对膀胱癌血管生成的影响及作用机制。方法 构建ANG突变质粒(BIU87-ANG~(H13R)、BIU87-ANG~(H114RDNA Methyltransferas抑制剂)),与BIU87-ANG组成实验组，BIU87-C1为对照组。采用pEGFP-C1-ANG~(H13R)、pEGFP-C1-ANG~(H114R)、pEGFP-C1-ANG及pEGFP-C1稳定转染膀胱癌BIU87细胞，构建稳定转染细胞系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路中的相关靶蛋白；采用鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)血管生成实验和小管形成实验检测ANG及其突变体对膀胱RNA virus infection癌血管生成的影响；采用双荧光素酶报告基因系统检测过表确认细节达核糖核酸酶抑制因子时核糖体RNA(rRNA)的转录活性。结果 稳定转染ANG及其突变体的膀胱癌BIU87细胞系构建成功；当ANG及突变体过表达时，磷酸化PI3K、磷酸化GSK3(α/β)、磷酸化AKT、磷酸化mTOR、磷酸化PTEN水平增加；CAM血管生成实验和小管形成实验结果表明，实验组(BIU87-ANG~(H13R)、BIU87-ANG~(H114R)、BIU87-ANG)CAM血管生成及小管形成均明显多于对照组(BIU87-C1),差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果表明过表达核糖核酸酶抑制因子抑制rRNA的转录活性。结论 ANG及其突变体可能通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进膀胱癌肿瘤血管生成。

目的:本研究通过建立db/db小鼠模型及高糖处理的HT22细胞模型,观察益糖康对db/db小鼠行为学功能和神经元及突触损伤,并且观察了益糖康对db/db小鼠模型和高糖诱导的HT22细胞中铁代谢、氧化应激/脂质过氧化以及铁死亡的影响,旨在讨论益糖康对T2DM认知障碍以及海马神经元铁死亡的改善作用以及相关机制,为益糖康的临床应用提供一定理论依据。材料与方法:论文一:益糖康对db/db小鼠认知障碍的改善以及海马神经元和突触可塑性损伤的修复SPF级雄性db/db小鼠30只,随机分为3组:模型组(db/db组)、西药(西药选用利拉鲁肽Liraglutide)对照组(LIRA组)、益糖康组(YTK组);10只db/m小鼠作为空白对照组(db/m组)。饲养至第10周时进行造模,YTK组小鼠予以益MEK抑制剂糖康煎剂灌胃30g·kg~(-1)·d~(-1),LIRA组每日腹腔注射利拉鲁肽200μg·kg~(-1),db/m组和db/db组小鼠给予与每日灌胃益MLN4924糖康煎剂同体积蒸馏水,造模时间共5周。首先对小鼠空腹血糖进行检测;通过葡萄糖耐量、胰岛素耐量、丙酮酸耐量实验观察小鼠糖代谢、胰岛素储备以及肝糖异生能力;生化分析检测各组小鼠血清TG、TC及LDL-C水平;ELISA检测各组小鼠血清INS及Hb A1C水平;Morris水迷宫、Y迷宫和旷场实验对小鼠进行行为学检测;透射电镜观察神经元突触完整性;FJC染色、Nissl染色观察神经元状态;免疫荧光检测海马Neu N、MAP2的表达;Western blot检测海马PSD95、SYN及BDNF等突触相关蛋白表达。通过以上实验验证益糖康是否可以改善db/db小鼠认知障碍以及神经元和突触可塑性损伤。论文二:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁死亡改善研究实验动物分组、给药方法同论文一。通过Cox1和Cox4的免疫双标染色检测海马神经元线粒体功能;透射电镜观察海马神经元线粒体结构;生化及ELISA检测血清和海马组织中GSH水平及GSH-Px活性;Western blot及免疫荧光检测海马神经元铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11及ACSL4表达;q-PCR检测GPX4及SLC7A11 m RNA表达。通过以上实验验证益糖康是否可以抑制db/db小鼠海马神经元铁死亡。论文三:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁超载和氧化应激改善的机制研究实验动物分组、给药方法同论文一。生化分析检测血清和海马组织中SOD、CAT及MDA水平;DHE染色检测海马ROS含量;Western blot检测海马NOX2、NOX4及SOD2表达;Western blot及免疫组化检测海马4-HNE表达;血清铁及组织铁试剂盒检测血清及海马组织中铁含量;普鲁士蓝染色观察海马组织CA1、CA3及DG区中铁的分布;Western blot检测海马中铁储存蛋白FTL、FTH,铁转运相关蛋白Tf R1、DMT1、FPN1,线粒体铁储存蛋白Mtft及线粒体铁转运蛋白Mfrn2的表达;q-PCR检测Tf R1及FPN1 m RNA表达。通过以上实验验证益糖康对db/db小鼠脑内铁超载以及氧化应激的作用以及相关机制。论文四:益糖康抑制高糖诱导的HT22海马神经元细胞铁超载、氧化应激及铁死亡的机制研究将HT22海马神经元细胞予以高糖(50m M)处理48h建立高糖模型,同时制备益糖康含药血清。细胞实验共设置三部分分组:(1)第一部分设置四组:正常对照(Con)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;高糖(HG)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;铁死亡抑制剂(Fer-1)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+10μM Fer-1处理48h;益糖康(YTK)组:50m M葡萄糖培养基+5%大鼠含药血清处理48h。通过JC-1染色和透射电镜观察细胞线粒体功能和结构;通过C11 BODIPY 581/591染色、western blot及免疫荧光染色观察HT22细胞脂质过氧化和PSD95、ACSL4、GPX4和SLC7A11蛋白表达。本部分主要探究高糖是否诱导了神经元铁死亡,以及益糖康含药血清是否可以抑制铁死亡的发生。(2)第二部分设置五组:正常对照(Con)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;高糖(HG)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;铁螯合剂(DFO)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+100μM DFO处理48h;抗氧化剂(NAC)组:2m M NAC预处理4h后,50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;益糖康(YTK)组:50m M葡萄糖培养基+5%大鼠含药血清处理48h。通过JC-1染色和透射电镜观察细胞线粒体功能和结构;通过DCFH-DA染色、C11 BODIPY 581/591染色以及western blot观察细胞氧化应激、脂质过氧化水平以及SOD2表达;通过钙黄绿素染色以及Ferro Orange染色观察HT22细胞Fe~(2+)水平;western blot检测铁相关蛋白FTL、FTH、Tf R1、FPN1及Mfrn2蛋白表达。本部分主要探究高糖是否通过相关调控通路诱导了铁超载和氧化应激,进而引发神经元铁死亡,而益糖康含药血清是否可以降低铁超载和氧化应激,从而抑制铁死亡的发生。(3)第三部分设置四组:正常对照(Con)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理24h;铁死亡激动剂(RSL3)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+0.25μM RSL3处理24h;铁死亡抑制剂(RSL3+Fer-1)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+0.25μM RSL3+10μM Fer-1处理24h;益糖康处理组(RSL3+YTK)组:25m M葡萄糖培养基+0.25μM RSL3+5%含药大鼠血清处理24h。通过透射电镜观察细胞线粒体结构;通过C11 BODIPY 581/591染色观察细胞脂质过氧化;western blot及免疫荧光染色观察ACSL4、GPX4和SLC7A11蛋白表达。本部分主要探究益糖康是否可以改善RSL3诱导的铁死亡,以表明其对GPX4表达和铁死亡是否有直接作用。结果:论文一:益糖康对db/db小鼠认知障碍的改善以及海马神经元和突触可塑性损伤的修复1.益糖康对糖脂水平以及胰岛素抵抗的改善:与db/m组相比,db/db组空腹血糖值显著升高(P<0.05),三种耐量实验的AUC均显著增加(P<0.05),血清INS及Hb A1C水平明显升高(P<0.05),TG、TC及LDL-C水平显著升高(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组与YTK组血糖显著下降(P<0.05),葡萄糖耐量与胰岛素耐量AUC显著减少(P<0.05),INS及Hb A1C有明显改善(P<0.05),TG、TC及LDL-C水平显著降低(P<0.05)。结果表明,益糖康可以显著降低db/db小鼠糖脂水平异常,改善胰岛素抵抗。2.益糖康对行为学水平的改善:与db/m组相比,db/db小鼠水迷宫实验中在1-5天内逃逸潜伏时间均显著增加(P<0.05),第五天逃逸路程增加,2min内穿越圆台位置次数显著减少(P<0.05),Y迷宫实验中在新异臂探索的时间百分比均降低(P<0.05),旷场实验中在中心区域活动的路程及时间与总路程和时间的百分比均减少(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组与YTK组小鼠水迷宫实验中逃逸时间均下降(P<0.05),第五天逃逸路程缩短,穿越圆台位置次数增加(P<0.05),Y迷宫实验中在新异臂探索时间百分比上升(P<0.05),而旷场实验中YTK组小鼠的中心区域路程比及时间比均显著增加(P<0.05),但LIRA组相较db/db组差异并无明显统计学意义。结果表明,益糖康可以显著提高db/db小鼠的学习记忆功能,缓解焦虑状态,改善认知功能障碍。3.益糖康对海马神经元和突触可塑性的改善:与db/m组相比,db/db小鼠海马组织中FJC阳性细胞数量显著增加(P<0.05),海马CA1、CA3区以及齿状回(Dentate gyrus,DG)的尼氏染色变浅,尼氏小体数量减少(P<0.05),Neu N和MAP2阳性区域显著降低(P<0.05),PSD95、SYN和BDNF表达显著降低(P<0.05),突触间隙宽度增加,突触间致密物质减少;与db/db组相比,LIRA组与YTK组小鼠FJC阳性细胞的数量显著减少(P<0.05),海马各区域尼氏小体数量增多(P<0.05),MAP2与Neu N阳性表达显著增加(P<0.05),PSD95、SYN和BDNF表达显著提升(P<0.05),海马神经元的突触损伤显著改善。结果表明,益糖康可以修复db/db小鼠海马神经元及突触可塑性损伤,改善神经元及突触相关功能蛋白表达。论文二:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁死亡改善研究1.益糖康对海马神经元线粒体功能的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠Cox1荧光表达减弱(P<0.05),Cox4荧光表达增加(P<0.05),线粒体萎缩、线粒体膜变厚、线粒体嵴减少,部分线粒体膜出现破裂情况;与db/db组相比,LIRA组和YTK组Cox1表达上升(P<0.05),Cox4表达下调(P<0.05),线粒体结构改善,线粒体大小恢复,线粒体嵴增加。结果提示益糖康可以改善db/db小鼠海马神经元线粒体功能结构损伤,改善神经元出现的铁死亡病理形态。2.海马GSH水平及GSH-Px活性的改善:与db/m组相比,db/db小鼠GSH水平及GSH-Px活性显著降低(P<0.05);与db/db组相fetal head biometry比,LIRA组和YTK组GSH及GSH-Px有明显改善(P<0.05)。结果表明,益糖康可有效提升db/db小鼠GSH水平和GSH-Px活性。3.益糖康对海马神经元铁死亡相关调控蛋白表达的调控:与db/m组相比,db/db组小鼠海马GPX4及SLC7A11蛋白表达明显降低(P<0.05),而ACSL4蛋白表达显著升高(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组GPX4及SLC7A11表达上调(P<0.05),ACSL4表达下调(P<0.05)。结果表明,益糖康可以调节db/db小鼠海马内铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11及ACSL4表达。论文三:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁超载和氧化应激改善的机制研究1.益糖康对海马神经元氧化应激的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠血清和海马组织中SOD含量显著降低(P<0.05),DHE染色中ROS水平显着增加(P<0.05),海马NOX2、NOX4表达显着增加,SOD2表达降低(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组SOD水平上升(P<0.05),ROS水平显着降低(P<0.05),海马NOX2、NOX4表达降低,SOD2表达上调(P<0.05)。结果提示,益糖康可以改善db/db小鼠海马氧化应激。2.益糖康对海马神经元脂质过氧化的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠血清和海马组织中MDA水平升高(P<0.05),4-HNE表达显著增加(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组MDA水平下降(P<0.05),海马4-HNE蛋白表达降低(P<0.05)。结果提示,益糖康可以降低db/db小鼠海马脂质过氧化物积累,降低脂质过氧化。3.益糖康对海马铁超载的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠血清及海马组织中铁含量均明显升高(P<0.05),海马组织CA1、CA3及DG区Fe阳性区域面积均明显增加(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组小鼠血清和海马组织铁含量较db/db组显著降低(P<0.05),海马组织CA1、CA3及DG区Fe阳性区域面积均降低(P<0.05)。结果提示,益糖康可以有效降低db/db小鼠海马铁超载。4.益糖康对海马铁相关蛋白的调控:与db/m组比较,db/db小鼠海马铁储存蛋白FTH表达下降(P<0.05),铁相关转运蛋白Tf R1、DMT1表达显著升高(P<0.05),FPN1表达降低(P<0.05),Tf R1 m RNA表达明显升高,FPN1 m RNA表达降低(P<0.05),线粒体铁储存蛋白Mtft表达下降(P<0.05),线粒体铁转运蛋白Mfrn2表达显著升高(P<0.05);与db/db组比较,LIRA组和YTK组小鼠海马FTH表达升高(P<0.05),Tf R1、DMT1表达降低(P<0.05),FPN1表达显著升高(P<0.05),海马Tf R1 m RNA表达下降,FPN1 m RNA上升(P<0.05)Mtft表达升高(P<0.05),Mfrn2表达降低(P<0.05)。结果提示,益糖康可以上调海马铁储存蛋白FTH表达,下调铁转入蛋白Tf R1与DMT1表达,上调铁转出蛋白FPN1表达,同时上调海马线粒体铁储存蛋白Mtft表达,下调线粒体铁转运蛋白Mfrn2表达。论文四:益糖康抑制高糖诱导的HT22海马神经元细胞铁超载、氧化应激及铁死亡的机制研究1.益糖康对高糖诱导的HT22细胞铁死亡的改善:与Con组比较,HG组细胞JC-1 Aggregation/JC-1 Monomer比值明显下降(P<0.05),线粒体结构出现皱缩、线粒体膜增厚,C11 BODIPY 581/591氧化态/还原态比值显著升高(P<0.05),同时ACSL4表达上调,PSD95、GPX4和SLC7A11蛋白表达下调(P<0.05);与HG组比较,Fer-1组和YTK组细胞JC-1 Aggregation/JC-1 Monomer比值显著提高(P<0.05),细胞线粒体结构改善,线粒体大小恢复,BODIPY 581/591氧化态/还原态比值降低(P<0.05),ACSL4表达减弱,PSD95、GPX4和SLC7A11蛋白表达上升(P<0.05)。结果提示,益糖康可以改善高糖诱导的HT22细胞铁死亡。2.益糖康对高糖诱导的HT22细胞氧化应激和脂质过氧化的改善:与Con组比较,HG组细胞ROS水平以及BODIPY 581/591氧化态/还原态比值水平显著升高(P<0.05),SOD2蛋白表达降低(P<0.05);与HG组比较,DFO组、NAC组和YTK组细胞ROS水平以及BODIPY 581/591氧化态/还原态比值水平降低(P<0.05),SOD2蛋白表达升高(P<0.05)。结果提示,益糖康可以降低高糖诱导的HT22细胞氧化应激和脂质过氧化水平。3.益糖康对高糖诱导的HT22细胞铁超载的改善及相关蛋白的调控:与Con组相比,HG组细胞钙黄绿素与Ferro Orange染色阳性区域面积均明显增加,Fe~(2+)水平升高(P<0.05),Tf R1、Mfrn2表达显著升高,FTH、FPN1表达显著降低(P<0.05);与HG组比较,DFO组和YTK组细胞两种染色阳性区域面积显著降低,Fe~(2+)水平显著降低(P<0.05),YTK组细胞Tf R1、Mfrn2表达显著下调,FTH和FPN1表达显著上调(P<0.05)。结果提示,益糖康可以通过上调铁储存蛋白FTH表达,下调胞质和线粒体铁转入蛋白Tf R1与Mfrn2表达,上调铁转出蛋白FPN1表达,从而显著降低高糖诱导的HT22铁超载。4.益糖康对RSL3诱导的HT22铁死亡的作用:与Con组比较,RSL3组细胞线粒体结构出现皱缩、线粒体膜增厚,部分线粒体破裂,出现铁死亡典型表现,C11BODIPY 581/591氧化态/还原态比值显著升高(P<0.05),脂质过氧化水平加重,同时ACSL4表达上调,GPX4和SLC7A11蛋白表达下调(P<0.05);与RSL3组比较,Fer-1组细胞线粒体结构改善,线粒体大小恢复,细胞BODIPY 581/591氧化态/还原态比值降低(P<0.05),ACSL4表达减弱,GPX4和SLC7A11蛋白表达上升(P<0.05);YTK组线粒体虽有部分恢复,但相对正常线粒体大小仍有差距,少部分线粒体破裂未得到改善,虽然BODIPY 581/591氧化态/还原态比值降低(P<0.05),GPX4蛋白表达升高(P<0.05),但较Con组与Fer-1组仍有差距,且ACSL4与SLC7A11蛋白表达无显著差异性改变。结果说明,益糖康对RSL3诱导的GPX4低表达和铁死亡调控有限。结论:1.益糖康可以改善T2DM导致的认知障碍,修复神经元和突触可塑性损伤。2.益糖康可以修复线粒体结构和功能损伤,上调GPX4和SLC7A11蛋白表达,下调ACSL4蛋白表达,改善T2DM诱导的海马神经元铁死亡。3.益糖康可能通过上调铁储存蛋白FTH表达,下调铁转入蛋白Tf R1与DMT1表达,上调铁转出蛋白FPN1表达,同时上调海马线粒体铁储存蛋白Mtft表达,下调线粒体铁转运蛋白Mfrn2表达,改善T2DM诱导的海马神经元铁超载。4.益糖康可能通过降低ROS和脂质氧化物水平,提高抗氧化物活性从而改善T2DM诱导的海马神经元氧化应激和脂质过氧化。5.益糖康可能通过调控铁代谢相关蛋白缓解铁超载,减弱氧化应激和脂质过氧化,从而改善T2DM诱导的海马神经元铁死亡,恢复认知功能。

对流层臭氧浓度不断升高,对作物的生长发育以及产量造成不可忽视的影响。从新的角度解析作物响应臭氧胁迫的遗传基础、培育耐臭氧的新品种是植物学的重要任务。DNA甲基化是表观遗传修饰的重要途径,在维持基因组稳定、基因组进化,特别是在调节植物生长发育、以及植物快速适应非生物胁迫等方面起到重要作用。本研究以水稻DNA甲基转移酶功能缺失突变体Osmet1-2后代为材料,基于它在基因组上随机位点甲基化缺失,并能引起基因表达模式改变等特征,在群体水平筛选表型上相较于日本晴野生型更能抵御臭氧胁迫的突变体抗性株系以及敏感株系,并通过转录组学方法挖掘抗臭氧响应基因,探究其响应胁迫的分子机制。臭氧处理采用开顶箱(OTC)法,浓度为200 nmol·mol~(-1),研究结果如下:1.对所种植的40个系共224个水稻Osmet1-2杂合突变体的后代进行基因型鉴定,共鉴定到135株Osmet1-2~blood‐based biomarkers(+/-)杂合基因型,89株Osmet1-2~(+/+)纯合基因型。2.通过农艺性状筛选出一系列臭氧胁迫抗性和敏感性突变体,选取代表性抗性和敏感性系共31个样本进行转录组分析。3.抗性系3-H-6、5-H-6、13-H-9分别鉴定出1811、1047、730个诱导型差异表达基因(DEGs),获得共差异表达基因520个。它们显著富集在叶绿体、质体等细胞组分,叶绿素生物合成过程的正调控、叶绿体靶向信号识别颗粒等生物学进程,以及谷氨酸合成酶活性、氧化还原酶活性等分子功能。同时,显著富集在卟啉代谢、光合生物的固碳作用、植物昼夜节律、糖酵解/糖异生、丙氨酸代谢、甘油酯代谢等通路,说明抗性系突变体主要通过光合作用、能量转化等通路,提高基础代谢和光合能力,以此积极响应臭氧胁迫,降低胁迫导致的机体损伤程度。4.进一步对抗性和敏感系突变体进行比较转录组分析发现,与对照相比,抗性系共有且与敏感系相异的核心诱导型差异表达基selleck Alpelisib因64个,主要对其中的6个光合作用相关基因,3个表观遗传相关基因,1个反转座子等基因进行深入分析,涉及到光合作用、氮代谢途径、卟啉与叶绿素代谢通路、植物昼夜节律途径、泛素化、苯丙烷类的生物合成等通路。说明抗性系具有独特的抵御臭氧胁迫的途径。此外,发现抗性系中反转录转座子(LOC＿Os07g10060)在抗性系中显著差异表达,并且调控侧翼基因的表达。这也是反转座子在抗臭氧胁迫中作用的首例报道。5.对64个抗性系特异性的核心诱导型臭氧响应基因进一步筛选。随机筛选出对10个候选基因进行q RT-PCR验证,基因的表达量变化与转录组数据趋势一致。为后续水稻耐臭氧分子机制的研究奠定了关键前期基础。AMG510体内实验剂量本研究从转录组揭示水稻表观突变体耐臭氧的分子机制,为表观遗传学在水稻耐臭氧新品种选育提中的应用提供思路,筛选到的耐臭氧候选基因为解决作物育种工作中不可避免的臭氧胁迫危机提供了理论基础。