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目的:本研究通过建立db/db小鼠模型及高糖处理的HT22细胞模型,观察益糖康对db/db小鼠行为学功能和神经元及突触损伤,并且观察了益糖康对db/db小鼠模型和高糖诱导的HT22细胞中铁代谢、氧化应激/脂质过氧化以及铁死亡的影响,旨在讨论益糖康对T2DM认知障碍以及海马神经元铁死亡的改善作用以及相关机制,为益糖康的临床应用提供一定理论依据。材料与方法:论文一:益糖康对db/db小鼠认知障碍的改善以及海马神经元和突触可塑性损伤的修复SPF级雄性db/db小鼠30只,随机分为3组:模型组(db/db组)、西药(西药选用利拉鲁肽Liraglutide)对照组(LIRA组)、益糖康组(YTK组);10只db/m小鼠作为空白对照组(db/m组)。饲养至第10周时进行造模,YTK组小鼠予以益MEK抑制剂糖康煎剂灌胃30g·kg~(-1)·d~(-1),LIRA组每日腹腔注射利拉鲁肽200μg·kg~(-1),db/m组和db/db组小鼠给予与每日灌胃益MLN4924糖康煎剂同体积蒸馏水,造模时间共5周。首先对小鼠空腹血糖进行检测;通过葡萄糖耐量、胰岛素耐量、丙酮酸耐量实验观察小鼠糖代谢、胰岛素储备以及肝糖异生能力;生化分析检测各组小鼠血清TG、TC及LDL-C水平;ELISA检测各组小鼠血清INS及Hb A1C水平;Morris水迷宫、Y迷宫和旷场实验对小鼠进行行为学检测;透射电镜观察神经元突触完整性;FJC染色、Nissl染色观察神经元状态;免疫荧光检测海马Neu N、MAP2的表达;Western blot检测海马PSD95、SYN及BDNF等突触相关蛋白表达。通过以上实验验证益糖康是否可以改善db/db小鼠认知障碍以及神经元和突触可塑性损伤。论文二:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁死亡改善研究实验动物分组、给药方法同论文一。通过Cox1和Cox4的免疫双标染色检测海马神经元线粒体功能;透射电镜观察海马神经元线粒体结构;生化及ELISA检测血清和海马组织中GSH水平及GSH-Px活性;Western blot及免疫荧光检测海马神经元铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11及ACSL4表达;q-PCR检测GPX4及SLC7A11 m RNA表达。通过以上实验验证益糖康是否可以抑制db/db小鼠海马神经元铁死亡。论文三:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁超载和氧化应激改善的机制研究实验动物分组、给药方法同论文一。生化分析检测血清和海马组织中SOD、CAT及MDA水平;DHE染色检测海马ROS含量;Western blot检测海马NOX2、NOX4及SOD2表达;Western blot及免疫组化检测海马4-HNE表达;血清铁及组织铁试剂盒检测血清及海马组织中铁含量;普鲁士蓝染色观察海马组织CA1、CA3及DG区中铁的分布;Western blot检测海马中铁储存蛋白FTL、FTH,铁转运相关蛋白Tf R1、DMT1、FPN1,线粒体铁储存蛋白Mtft及线粒体铁转运蛋白Mfrn2的表达;q-PCR检测Tf R1及FPN1 m RNA表达。通过以上实验验证益糖康对db/db小鼠脑内铁超载以及氧化应激的作用以及相关机制。论文四:益糖康抑制高糖诱导的HT22海马神经元细胞铁超载、氧化应激及铁死亡的机制研究将HT22海马神经元细胞予以高糖(50m M)处理48h建立高糖模型,同时制备益糖康含药血清。细胞实验共设置三部分分组:(1)第一部分设置四组:正常对照(Con)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;高糖(HG)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;铁死亡抑制剂(Fer-1)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+10μM Fer-1处理48h;益糖康(YTK)组:50m M葡萄糖培养基+5%大鼠含药血清处理48h。通过JC-1染色和透射电镜观察细胞线粒体功能和结构;通过C11 BODIPY 581/591染色、western blot及免疫荧光染色观察HT22细胞脂质过氧化和PSD95、ACSL4、GPX4和SLC7A11蛋白表达。本部分主要探究高糖是否诱导了神经元铁死亡,以及益糖康含药血清是否可以抑制铁死亡的发生。(2)第二部分设置五组:正常对照(Con)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;高糖(HG)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;铁螯合剂(DFO)组:50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+100μM DFO处理48h;抗氧化剂(NAC)组:2m M NAC预处理4h后,50m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理48h;益糖康(YTK)组:50m M葡萄糖培养基+5%大鼠含药血清处理48h。通过JC-1染色和透射电镜观察细胞线粒体功能和结构;通过DCFH-DA染色、C11 BODIPY 581/591染色以及western blot观察细胞氧化应激、脂质过氧化水平以及SOD2表达;通过钙黄绿素染色以及Ferro Orange染色观察HT22细胞Fe~(2+)水平;western blot检测铁相关蛋白FTL、FTH、Tf R1、FPN1及Mfrn2蛋白表达。本部分主要探究高糖是否通过相关调控通路诱导了铁超载和氧化应激,进而引发神经元铁死亡,而益糖康含药血清是否可以降低铁超载和氧化应激,从而抑制铁死亡的发生。(3)第三部分设置四组:正常对照(Con)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清处理24h;铁死亡激动剂(RSL3)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+0.25μM RSL3处理24h;铁死亡抑制剂(RSL3+Fer-1)组:25m M葡萄糖培养基+5%正常大鼠血清+0.25μM RSL3+10μM Fer-1处理24h;益糖康处理组(RSL3+YTK)组:25m M葡萄糖培养基+0.25μM RSL3+5%含药大鼠血清处理24h。通过透射电镜观察细胞线粒体结构;通过C11 BODIPY 581/591染色观察细胞脂质过氧化;western blot及免疫荧光染色观察ACSL4、GPX4和SLC7A11蛋白表达。本部分主要探究益糖康是否可以改善RSL3诱导的铁死亡,以表明其对GPX4表达和铁死亡是否有直接作用。结果:论文一:益糖康对db/db小鼠认知障碍的改善以及海马神经元和突触可塑性损伤的修复1.益糖康对糖脂水平以及胰岛素抵抗的改善:与db/m组相比,db/db组空腹血糖值显著升高(P<0.05),三种耐量实验的AUC均显著增加(P<0.05),血清INS及Hb A1C水平明显升高(P<0.05),TG、TC及LDL-C水平显著升高(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组与YTK组血糖显著下降(P<0.05),葡萄糖耐量与胰岛素耐量AUC显著减少(P<0.05),INS及Hb A1C有明显改善(P<0.05),TG、TC及LDL-C水平显著降低(P<0.05)。结果表明,益糖康可以显著降低db/db小鼠糖脂水平异常,改善胰岛素抵抗。2.益糖康对行为学水平的改善:与db/m组相比,db/db小鼠水迷宫实验中在1-5天内逃逸潜伏时间均显著增加(P<0.05),第五天逃逸路程增加,2min内穿越圆台位置次数显著减少(P<0.05),Y迷宫实验中在新异臂探索的时间百分比均降低(P<0.05),旷场实验中在中心区域活动的路程及时间与总路程和时间的百分比均减少(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组与YTK组小鼠水迷宫实验中逃逸时间均下降(P<0.05),第五天逃逸路程缩短,穿越圆台位置次数增加(P<0.05),Y迷宫实验中在新异臂探索时间百分比上升(P<0.05),而旷场实验中YTK组小鼠的中心区域路程比及时间比均显著增加(P<0.05),但LIRA组相较db/db组差异并无明显统计学意义。结果表明,益糖康可以显著提高db/db小鼠的学习记忆功能,缓解焦虑状态,改善认知功能障碍。3.益糖康对海马神经元和突触可塑性的改善:与db/m组相比,db/db小鼠海马组织中FJC阳性细胞数量显著增加(P<0.05),海马CA1、CA3区以及齿状回(Dentate gyrus,DG)的尼氏染色变浅,尼氏小体数量减少(P<0.05),Neu N和MAP2阳性区域显著降低(P<0.05),PSD95、SYN和BDNF表达显著降低(P<0.05),突触间隙宽度增加,突触间致密物质减少;与db/db组相比,LIRA组与YTK组小鼠FJC阳性细胞的数量显著减少(P<0.05),海马各区域尼氏小体数量增多(P<0.05),MAP2与Neu N阳性表达显著增加(P<0.05),PSD95、SYN和BDNF表达显著提升(P<0.05),海马神经元的突触损伤显著改善。结果表明,益糖康可以修复db/db小鼠海马神经元及突触可塑性损伤,改善神经元及突触相关功能蛋白表达。论文二:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁死亡改善研究1.益糖康对海马神经元线粒体功能的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠Cox1荧光表达减弱(P<0.05),Cox4荧光表达增加(P<0.05),线粒体萎缩、线粒体膜变厚、线粒体嵴减少,部分线粒体膜出现破裂情况;与db/db组相比,LIRA组和YTK组Cox1表达上升(P<0.05),Cox4表达下调(P<0.05),线粒体结构改善,线粒体大小恢复,线粒体嵴增加。结果提示益糖康可以改善db/db小鼠海马神经元线粒体功能结构损伤,改善神经元出现的铁死亡病理形态。2.海马GSH水平及GSH-Px活性的改善:与db/m组相比,db/db小鼠GSH水平及GSH-Px活性显著降低(P<0.05);与db/db组相fetal head biometry比,LIRA组和YTK组GSH及GSH-Px有明显改善(P<0.05)。结果表明,益糖康可有效提升db/db小鼠GSH水平和GSH-Px活性。3.益糖康对海马神经元铁死亡相关调控蛋白表达的调控:与db/m组相比,db/db组小鼠海马GPX4及SLC7A11蛋白表达明显降低(P<0.05),而ACSL4蛋白表达显著升高(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组GPX4及SLC7A11表达上调(P<0.05),ACSL4表达下调(P<0.05)。结果表明,益糖康可以调节db/db小鼠海马内铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11及ACSL4表达。论文三:益糖康对db/db小鼠海马神经元铁超载和氧化应激改善的机制研究1.益糖康对海马神经元氧化应激的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠血清和海马组织中SOD含量显著降低(P<0.05),DHE染色中ROS水平显着增加(P<0.05),海马NOX2、NOX4表达显着增加,SOD2表达降低(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组SOD水平上升(P<0.05),ROS水平显着降低(P<0.05),海马NOX2、NOX4表达降低,SOD2表达上调(P<0.05)。结果提示,益糖康可以改善db/db小鼠海马氧化应激。2.益糖康对海马神经元脂质过氧化的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠血清和海马组织中MDA水平升高(P<0.05),4-HNE表达显著增加(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组MDA水平下降(P<0.05),海马4-HNE蛋白表达降低(P<0.05)。结果提示,益糖康可以降低db/db小鼠海马脂质过氧化物积累,降低脂质过氧化。3.益糖康对海马铁超载的改善:与db/m组相比,db/db组小鼠血清及海马组织中铁含量均明显升高(P<0.05),海马组织CA1、CA3及DG区Fe阳性区域面积均明显增加(P<0.05);与db/db组相比,LIRA组和YTK组小鼠血清和海马组织铁含量较db/db组显著降低(P<0.05),海马组织CA1、CA3及DG区Fe阳性区域面积均降低(P<0.05)。结果提示,益糖康可以有效降低db/db小鼠海马铁超载。4.益糖康对海马铁相关蛋白的调控:与db/m组比较,db/db小鼠海马铁储存蛋白FTH表达下降(P<0.05),铁相关转运蛋白Tf R1、DMT1表达显著升高(P<0.05),FPN1表达降低(P<0.05),Tf R1 m RNA表达明显升高,FPN1 m RNA表达降低(P<0.05),线粒体铁储存蛋白Mtft表达下降(P<0.05),线粒体铁转运蛋白Mfrn2表达显著升高(P<0.05);与db/db组比较,LIRA组和YTK组小鼠海马FTH表达升高(P<0.05),Tf R1、DMT1表达降低(P<0.05),FPN1表达显著升高(P<0.05),海马Tf R1 m RNA表达下降,FPN1 m RNA上升(P<0.05)Mtft表达升高(P<0.05),Mfrn2表达降低(P<0.05)。结果提示,益糖康可以上调海马铁储存蛋白FTH表达,下调铁转入蛋白Tf R1与DMT1表达,上调铁转出蛋白FPN1表达,同时上调海马线粒体铁储存蛋白Mtft表达,下调线粒体铁转运蛋白Mfrn2表达。论文四:益糖康抑制高糖诱导的HT22海马神经元细胞铁超载、氧化应激及铁死亡的机制研究1.益糖康对高糖诱导的HT22细胞铁死亡的改善:与Con组比较,HG组细胞JC-1 Aggregation/JC-1 Monomer比值明显下降(P<0.05),线粒体结构出现皱缩、线粒体膜增厚,C11 BODIPY 581/591氧化态/还原态比值显著升高(P<0.05),同时ACSL4表达上调,PSD95、GPX4和SLC7A11蛋白表达下调(P<0.05);与HG组比较,Fer-1组和YTK组细胞JC-1 Aggregation/JC-1 Monomer比值显著提高(P<0.05),细胞线粒体结构改善,线粒体大小恢复,BODIPY 581/591氧化态/还原态比值降低(P<0.05),ACSL4表达减弱,PSD95、GPX4和SLC7A11蛋白表达上升(P<0.05)。结果提示,益糖康可以改善高糖诱导的HT22细胞铁死亡。2.益糖康对高糖诱导的HT22细胞氧化应激和脂质过氧化的改善:与Con组比较,HG组细胞ROS水平以及BODIPY 581/591氧化态/还原态比值水平显著升高(P<0.05),SOD2蛋白表达降低(P<0.05);与HG组比较,DFO组、NAC组和YTK组细胞ROS水平以及BODIPY 581/591氧化态/还原态比值水平降低(P<0.05),SOD2蛋白表达升高(P<0.05)。结果提示,益糖康可以降低高糖诱导的HT22细胞氧化应激和脂质过氧化水平。3.益糖康对高糖诱导的HT22细胞铁超载的改善及相关蛋白的调控:与Con组相比,HG组细胞钙黄绿素与Ferro Orange染色阳性区域面积均明显增加,Fe~(2+)水平升高(P<0.05),Tf R1、Mfrn2表达显著升高,FTH、FPN1表达显著降低(P<0.05);与HG组比较,DFO组和YTK组细胞两种染色阳性区域面积显著降低,Fe~(2+)水平显著降低(P<0.05),YTK组细胞Tf R1、Mfrn2表达显著下调,FTH和FPN1表达显著上调(P<0.05)。结果提示,益糖康可以通过上调铁储存蛋白FTH表达,下调胞质和线粒体铁转入蛋白Tf R1与Mfrn2表达,上调铁转出蛋白FPN1表达,从而显著降低高糖诱导的HT22铁超载。4.益糖康对RSL3诱导的HT22铁死亡的作用:与Con组比较,RSL3组细胞线粒体结构出现皱缩、线粒体膜增厚,部分线粒体破裂,出现铁死亡典型表现,C11BODIPY 581/591氧化态/还原态比值显著升高(P<0.05),脂质过氧化水平加重,同时ACSL4表达上调,GPX4和SLC7A11蛋白表达下调(P<0.05);与RSL3组比较,Fer-1组细胞线粒体结构改善,线粒体大小恢复,细胞BODIPY 581/591氧化态/还原态比值降低(P<0.05),ACSL4表达减弱,GPX4和SLC7A11蛋白表达上升(P<0.05);YTK组线粒体虽有部分恢复,但相对正常线粒体大小仍有差距,少部分线粒体破裂未得到改善,虽然BODIPY 581/591氧化态/还原态比值降低(P<0.05),GPX4蛋白表达升高(P<0.05),但较Con组与Fer-1组仍有差距,且ACSL4与SLC7A11蛋白表达无显著差异性改变。结果说明,益糖康对RSL3诱导的GPX4低表达和铁死亡调控有限。结论:1.益糖康可以改善T2DM导致的认知障碍,修复神经元和突触可塑性损伤。2.益糖康可以修复线粒体结构和功能损伤,上调GPX4和SLC7A11蛋白表达,下调ACSL4蛋白表达,改善T2DM诱导的海马神经元铁死亡。3.益糖康可能通过上调铁储存蛋白FTH表达,下调铁转入蛋白Tf R1与DMT1表达,上调铁转出蛋白FPN1表达,同时上调海马线粒体铁储存蛋白Mtft表达,下调线粒体铁转运蛋白Mfrn2表达,改善T2DM诱导的海马神经元铁超载。4.益糖康可能通过降低ROS和脂质氧化物水平,提高抗氧化物活性从而改善T2DM诱导的海马神经元氧化应激和脂质过氧化。5.益糖康可能通过调控铁代谢相关蛋白缓解铁超载,减弱氧化应激和脂质过氧化,从而改善T2DM诱导的海马神经元铁死亡,恢复认知功能。

对流层臭氧浓度不断升高,对作物的生长发育以及产量造成不可忽视的影响。从新的角度解析作物响应臭氧胁迫的遗传基础、培育耐臭氧的新品种是植物学的重要任务。DNA甲基化是表观遗传修饰的重要途径,在维持基因组稳定、基因组进化,特别是在调节植物生长发育、以及植物快速适应非生物胁迫等方面起到重要作用。本研究以水稻DNA甲基转移酶功能缺失突变体Osmet1-2后代为材料,基于它在基因组上随机位点甲基化缺失,并能引起基因表达模式改变等特征,在群体水平筛选表型上相较于日本晴野生型更能抵御臭氧胁迫的突变体抗性株系以及敏感株系,并通过转录组学方法挖掘抗臭氧响应基因,探究其响应胁迫的分子机制。臭氧处理采用开顶箱(OTC)法,浓度为200 nmol·mol~(-1),研究结果如下:1.对所种植的40个系共224个水稻Osmet1-2杂合突变体的后代进行基因型鉴定,共鉴定到135株Osmet1-2~blood‐based biomarkers(+/-)杂合基因型,89株Osmet1-2~(+/+)纯合基因型。2.通过农艺性状筛选出一系列臭氧胁迫抗性和敏感性突变体,选取代表性抗性和敏感性系共31个样本进行转录组分析。3.抗性系3-H-6、5-H-6、13-H-9分别鉴定出1811、1047、730个诱导型差异表达基因(DEGs),获得共差异表达基因520个。它们显著富集在叶绿体、质体等细胞组分,叶绿素生物合成过程的正调控、叶绿体靶向信号识别颗粒等生物学进程,以及谷氨酸合成酶活性、氧化还原酶活性等分子功能。同时,显著富集在卟啉代谢、光合生物的固碳作用、植物昼夜节律、糖酵解/糖异生、丙氨酸代谢、甘油酯代谢等通路,说明抗性系突变体主要通过光合作用、能量转化等通路,提高基础代谢和光合能力,以此积极响应臭氧胁迫,降低胁迫导致的机体损伤程度。4.进一步对抗性和敏感系突变体进行比较转录组分析发现,与对照相比,抗性系共有且与敏感系相异的核心诱导型差异表达基selleck Alpelisib因64个,主要对其中的6个光合作用相关基因,3个表观遗传相关基因,1个反转座子等基因进行深入分析,涉及到光合作用、氮代谢途径、卟啉与叶绿素代谢通路、植物昼夜节律途径、泛素化、苯丙烷类的生物合成等通路。说明抗性系具有独特的抵御臭氧胁迫的途径。此外,发现抗性系中反转录转座子(LOC＿Os07g10060)在抗性系中显著差异表达,并且调控侧翼基因的表达。这也是反转座子在抗臭氧胁迫中作用的首例报道。5.对64个抗性系特异性的核心诱导型臭氧响应基因进一步筛选。随机筛选出对10个候选基因进行q RT-PCR验证,基因的表达量变化与转录组数据趋势一致。为后续水稻耐臭氧分子机制的研究奠定了关键前期基础。AMG510体内实验剂量本研究从转录组揭示水稻表观突变体耐臭氧的分子机制,为表观遗传学在水稻耐臭氧新品种选育提中的应用提供思路,筛选到的耐臭氧候选基因为解决作物育种工作中不可避免的臭氧胁迫危机提供了理论基础。

在我国,对乙酰氨基酚(APAP)过量是急性肝衰竭(ALF)的常见病因。有研究称,APAP诱导的肝损伤与细胞抗氧化系统紊乱所导致的脂质过氧化物堆积有关。铁死亡是最近发现的一种新兴细胞死亡方式,与细胞内铁过载、氧化应激和脂质过氧化高度相关。关于APAP的诱导的肝细胞死亡方式,一般认为有细胞凋亡、细胞坏死和程序性坏死。然而,最近多项研究表明,铁死亡参与了APAP诱导的细胞死亡,并起到重要作用,有潜力成为一个新的治疗靶点。S-烯丙基半胱氨酸(SAC)是从成熟大蒜中提取的一种水溶性化合物,据相关研究报道,在多种疾病中,SAC具有较强的抗氧化、抗癌和抗炎特性,但其对于细胞铁死亡以及APAP肝毒性的作用却鲜有报道。在本次实验中,我们主要探究SAC对APAP诱导的肝细胞死亡的保护作用以及铁死亡是否参与,及其可能的机制。【目的】探讨SAC对APAP诱导的肝细胞损伤的保护作用及其可能的机制。【方法】1.采用MTT法检测SAC、铁死亡抑制剂Fer-1及Nrf2通路抑制剂ML385对于L-02细胞的毒性作用;检测不同浓度的APAP对L-02细胞的毒性作用;以及检测SAC在APAP诱导的肝细胞损伤中的保护作用,并使用Fer-1作为阳性对照,用ML385设置回复实验。2.采用活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧评估细胞氧化应激状态,从而探究SAC的抗氧化作用。3.检测细胞内GSH、MDA以查看该模型中L-02细胞内脂质过氧化物的累积情况,观察SAC及Fer-1对于L-02细胞脂质过氧化的保护作用。4.RT-qPCR检测xCT、GPX4、Tf R1及PTGS2四种铁死亡重要调控分子的mRNA的表达,侧面印证铁死亡的发生,同时反映SAC对这些铁死亡标志分子的调控情况。5.RT-qPCR、WB检测各组中Nrf2/NQOblood biomarker1/HO-1三种分子的变化,验证SAC是否通过Nrf2通路实现保护作用。【结果】1.在MTT实验中,结果显示,在Fer-1浓度为1μM、ML385浓度为2.5μM及SAC浓度为200μM时,对于L-02的增殖活性无明显影响;APAP对L-02的细胞毒性呈浓度依赖,在10m M的浓度下接近半数致死量;与APAP组相比,SAC预处理后细胞存活率明显升高,呈现浓度依赖性,在100μM的浓度下保护作用趋于最大;经过Fer-1预处理后细胞存活率上升;SAC的保护作用可被通路抑制剂ML385部分消除。2.ROS的检测结果显示:APAP组的ROS水平显著升高,表明细胞内氧化应激被高度激活。而经过SAC及Fer-1预处理后,胞内ROS水平较APAP组显著降低,这提示二者可以通过降低ROS的产生从而减轻氧化应激损伤。此外,相较SAC组,ML385组的ROS水平回升,表明SAC的保护作用被ML385部分消除。3.GSH及MDA的检测结果显示:经APAP处理后,L-02细胞内MDA浓度明显升高,并且GSH被降低,SAC及Fer-1显著降低了细胞中的MDA水平并且升高了GSH水平,并且该作用可以被ML385逆转。4.RT-qPCR检测xCT、GPX4、Tf R1及PTGS2:APAP处理可以降低L-02细胞内xCT及GPX4的表达,升高Tf R1及PTwww.selleck.cn/products/3-methyladenineGS2的表达,而SAC及Fer-1预处理逆转了这些改变。5.RT-qPCR、WB检测Nrf2/NQO1/HO-1:WB结果显示,APAP处理可降低NQO1和HO-1蛋白的表达,但是对Nrf2蛋白表达无明显影响;SAC处理可以激活Nrf2、NQO1及HO-1的表达,从而逆转APAP的抑制作用,并且SAC的激活作用可以被ML385消除。Fer-1对上述三种蛋白也有激活作用。RT-qPCR的结果与WB类似。【结论】1.SAC预处理减轻了APAP诱导的L-02细胞损伤,机制可能与减少ROS生成、GSH耗竭及MDA累积有关。2.Fer-1能够减轻APAP诱导的L-02细胞损伤,这提示铁死亡可能参与APAP诱导的肝细胞死亡。3.APAP处理导致L-02细胞脂质过氧化,并且降低了铁死亡标志物xCT及GPX4 mRNA表达,升高了铁死亡标志物Tf R1及PTGS2 mRNA表达,而SAC逆转了这些改变。这表明SAC可能通过抑制铁死亡实现保护作用。4.SAC对APAP诱导的L-02细胞损伤的保护作用是通过激活Nrf2及其下游蛋白NQO1GDC-0973和HO-1实现,且对该通路的激活可能是其抑制铁死亡的机制。

白色梅花鹿自古就有祥瑞的寓意,尽管国内梅花鹿养殖基数大,但梅花鹿毛色表型单一,毛色突变个体数量极少,白色梅花鹿育种进展缓慢。本研究基于白色梅花鹿及家系,从分子生物学角度探究白色梅花鹿遗传机制以及突变基因的分子机制。通过全基因组重测序技术,筛CP-690550选与梅花鹿白色表型相关差异信息。以制作皮肤组织切片和家系成员基因型表型分析进行验证。构建突变基因过表达质粒并进行细胞转染,检测细胞中黑色素合成量、酪氨酸酶活性、相关毛色基因表达水平,得到以下结果:1.重测序数据最终筛选到白色梅花鹿中有1个SV(结构变异)和5个非同义突变的SNPs(单核苷酸多态性位点)与毛色相关的差异区域,SV位于干细胞因子(Stem cell factor,SCF)(chr3:c.16444201-16454300delDinaciclib半抑制浓度),SNPs分别位于TYRP1(c.C137T:p.S46F)、LYST(c.C1667T:fluoride-containing bioactive glassp.S556L)、ICAT(c.C268G:p.P90A)、WRN(c.T1529C:P.I510T)和EPG5(c.A4762G:p.S1588G)基因。2.皮肤组织切片结果显示,白色梅花鹿皮肤组织中没有黑色素颗粒,对L-DOPA无明显反应,与对照组之间存在差异。3.SCF基因分型显示,3个家系成员脸部有白斑,为杂合基因型;3个家系成员表型正常,为纯合野生型基因型。4.成功构建SCF野生型(Pl RES2-EGFP-SCF1-9)和突变型(Pl RES2-EGFP-SCF789)表达载体。5.黑色素含量及酪氨酸酶活性结果显示,SCF1-9(野生型)黑色素含量和SCF-789(突变型)以及对照组差异极显著(P<0.01),SCF1-9酪氨酸酶活性和SCF789差异极显著(P<0.01),和对照组差异显著(P<0.05)。6.色素合成基因m RNA表达水平显示,SCF1-9的MITF-M m RNA表达量与对照组差异显著(P<0.05),与SCF789差异极显著(P<0.01);SCF1-9的SLC45A2 m RNA表达量与SCF789差异极显著(P<0.01);SCF1-9的SOX10 m RNA表达量与对照组和SCF789均差异极显著(P<0.01);SCF1-9的TYR m RNA表达量与对照组差异极显著(P<0.01),与SCF789差异显著(P<0.05)。7.蛋白表达水平显示,SCF1-9的MITF-M蛋白表达量与SCF789和对照组均差异显著(P<0.01),SCF1-9的TYR蛋白表达量与SCF789差异极显著(P<0.01),与对照组差异显著(P<0.05)。结合上述研究得出结论:(1)白色梅花鹿的毛色表型是SCF基因结构变异(c.16444201-16454300del)导致,该基因突变造成梅花鹿黑色素细胞缺失,皮肤及毛囊因缺乏黑色素细胞而无色素沉着;(2)在色素合成过程中,梅花鹿SCF基因通过ckit/SCF信号通路调控MITF-M表达,进一步上调TYR和SLC45A2的表达水平,正向调控梅花鹿色素合成过程。

目的 探讨脓毒症继发急性肾损伤过程中的凝血功能指标的变化情况，并分析脓毒症继发急性肾损伤发生的危险因素，旨在为改善患者预后提供参照。方法 回顾性分析2020年5月至2022年5月南阳市第二人民医院收治的45例脓毒症合并急性肾损伤患者(肾损伤组)，以及50例单纯脓毒症患者(脓毒症组)。比较肾损伤组和脓毒症组患者临床一般资料，相关症状评分和血压情况，超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)等炎症、生化指标，凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(FIB)等凝血指标，对脓毒症患者是否发生急性肾损伤进行多变量Cox回归分析。结果 肾损伤组患者的28 d病死率显著高于脓毒症组(P<0.05)。肾损伤组患者APACHEⅡ、SOFA评分均高于脓毒症组，SBP、DBP水平均低于脓毒症组(均P<0.05)。肾损伤组患者血清PCT、白细胞计数高于脓毒症组(P<0.05)，两组间hs-CRP、血红蛋白比较，无明显差异(P>0.05)。肾损伤组患者血清D-二聚体高于脓毒症组，FIB、抗凝血酶Ⅲ、血小板计数低于脓毒症组(P<0.05)，两组间PT比较，无明显差异(P>0.05PD0325901)。D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ、血小板、白细胞计数是发生急性肾损伤的影响因素(OR值=3.265AMG510体外、0.868、0.921、1.085，均P<0.05)。结论 脓毒症继发急性肾损伤过程中的凝血功能异Protein Expression常明显，临床需要及时关注D-二聚体、白细胞计数升高，抗凝血酶Ⅲ、血小板降低的患者。

目的 探讨采用赋能理论联合合理行为替代护理干预对良性前列腺增生(BPH)手术患者的影响。方法 选取2020年2月至2022年12月在河南省人民医院进行BPH手术的患者共计124例，以随机数字表法分为干预组(n=62)与对照组(n=62)，对照组实行常规护理干预，干预组实行赋能理论联合合理行为替代护理干预，对两组疼痛程度、生活质量、自我护理能力、术后并发症进行比较。结果 干预后MG132两组视觉模拟评分法(VAS)评分降低，干预组与对照组相比更低，差异有统计学意义(P <0.05)；干预后两组世界卫生组织生存质量测定量表简表(WHOQOL-BREF)评分提高干预组与对照组相比更高，差异有统计学意义(P <0.05)；干预后两组自我护理能力量表(ESCA)评分提高，干预组与对照组相比更高，差异有统计学意义(P <0.05)；干预组术后并发症发生STI sexually transmitted infection率(4.84%)与对照组(16.13%)相比更低，差异有统计学意义(P <0.05)。结论 BPH手术患者给予赋能理论联合合理行为替代护理干预，能够降低疼痛程度，提升生活质量及自我Emricasan护理能力，降低并发症发生风险。

目的：探讨三七总皂苷（PNS）是否通过调控铁死亡减轻槟榔碱（ANE）诱导的口腔黏膜下纤维化（OSF），并初步研究其机制。方法：采用ANE作用于人永生化角质形成细胞系HaCDibutyryl-cAMP体内实验剂量aT构建OSF模型，设置空白组，模型组（50 mg/L ANE），低、中、高剂量（12.5、25和50 mg/L）PNS组，以及liproxstatin-1（铁死亡抑制剂）组，共计6组。光镜观察HaCaT细胞形态学变化；CCK-8法检测细胞活力；Western blot检测细胞中Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平；透射电镜观察细胞线粒体形态学变化；FerroOrunmet medical needsange荧光探针检测细胞Fe~(2+)水平；DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）含量；比色法检测细胞内谷胱甘肽（GSH）含量。结果：与空白组比较，模型组HaCaT细胞多数呈长梭形，纤维化样外观，贴壁不牢靠，形态学改变显著，电镜下线粒体双层膜密度增加，嵴显著减少，呈典型的铁死亡表现，Col-Ⅰ蛋白表达增加，GPX4和SLC7A11蛋白表达降低，Fe~(2+)和ROS水平升高，GSH含量降低（均P<0.05）；与模型组相比，低、中、高剂量PNS组细胞多数恢复圆润，呈上皮细胞样，线粒体膜密度减小，嵴数目增加，形态趋于正常，Col-Ⅰ蛋白表达减少，ROS水平下降，GSH含量升高（均P<0.05）；与模型组相比，中、高剂量PNS组GPX4和SLC7A11蛋白表达显著上升，Fe~(2+)含量显著降低（均P<0.05）;liproxstatinEntinostat浓度-1组细胞和线粒体形态及各指标水平与高剂量PNS组相比无显著差异（均P>0.05）。结论：PNS可通过抑制ANE诱导的HaCaT细胞铁死亡减轻OSF。

目的 探讨妇科肿瘤患者经外周穿刺中心静脉置管（PICC）术后深静脉血栓的相关危险因素。方法 选取200例2020年3月—2022年3月医院收治的妇科肿瘤患者为调查对象，将其PICC术后并发深静脉血栓的30例患者作为深静脉血栓组；未并发深静脉血栓的170例患者作为无深静脉血栓组。通过单因素筛antibiotic residue removal选及多因素Logistic回归模型，分析妇科肿瘤患者PICC术后并发深静脉血栓的危险因素。结果 单因素分析结果显示，深静脉血栓组年龄大于无深静脉血栓组，纤维蛋白原、TT、APTT、淋巴细胞计数低于无深静脉血栓组，差异有统计学意义（P<0.05）；而两组BMI值、全血WBC、住院时间比较差异无统计学意义（P>0.05）。深静脉血栓组置入静脉为头静脉、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、PICC留置时间≥60 d、免疫功能低下、导管材料为硬质纤维导管、单次置管穿刺次数≥2次、既往血栓病史、使用紫杉醇类与烷化剂等化疗药物、PICC相关知识缺乏占比均高于无深静脉血栓组，差异有统计学意义（P<0.05）；而两组高血压、分化程度、肿瘤直径Compound C MW、导管位置、冠心病史、糖尿病史占比比较差异无统计学意义（P>0.05）。多因素Logistic回归分析显示，年龄偏大、置入静脉为头静脉、免疫功能低下、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、APTT指标过低、使用紫杉醇类与烷化剂等化疗药物、PICC相关知识缺乏是妇科肿瘤患者PICC术后并发深静脉血栓的影响因素（P<0.05）。结论 妇科肿瘤患者PICC术后出现深静脉血栓的影响因素包括年龄偏大、置入静脉为头静脉、免疫功能低下、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、APTT指标过低、使用紫杉醇类与烷化剂等化疗药物、PICC相关知识缺乏等，临床需尽早识别影响术后深静脉血栓的相关危险因素，以预防术AY-22989核磁后并发深静脉血栓。

目的:本研究通过观察三痹汤对类风湿关节炎模型大鼠足容积、关节炎指数评分、踝关节病理学形态及STAT3/RORγt信号通路相关因子表达水平的影响,探讨三痹汤治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:采用弗氏完全佐剂制备类风湿关节炎模型大鼠,将60只大鼠随机分为6组:空白组、模型组、三痹汤低剂量组(1.83 g/kg·d)、三痹汤中剂量组(3.67 g/kg·d)、三痹汤高剂量组(7.35 g/kg·d)、雷公藤多苷组(10g/kg·d),每组各10只。采用自制足容积测量仪测量各组大鼠足容积,评定各组大鼠关节炎指数评分,HE染色法观察各组大鼠踝关节病理学形态变化,ELISA法检测各组大鼠血清中IL-6、IFN-γ含量变化,免疫组织化学法检测各组大鼠滑膜组织中STAT3、RORγt、Foxp3表达水平,RT-PCR法检测各组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA表达水平。结果:1.各组大鼠足容积变化情况:与空白组比较,模型组、三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、三痹汤低剂量组及雷公藤多苷组大鼠足容积于初次致炎后第7天时显著增大(P<0.05);与模型组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、雷公藤多苷组大鼠足容积于初次致炎后第14、21、28、35天时显著减小(P<0.05),三痹汤低剂量组大鼠足容积于初次致炎后第21、28、35天时显著减小(P<0.05);与三痹汤低剂量组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、雷公藤多苷组大鼠足容积于初次致炎后第14、21、28、35天时显著减小(P<0.05);与雷公藤多苷组比较,三痹汤高剂量组大鼠足容积于初次致炎后第21天时显著减小(P<0.05),三痹汤中剂量组大鼠足容积于初次致炎后第14天时显著减小(P<0.05)。2.各组大鼠关节炎指数评分情况:与空白组比较,模型组、三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、三痹汤低剂量组及雷公藤多苷组大鼠于初次致炎后第7天时关节炎指数评分显著升高(P<0.05),此时关节炎指数评分≥6分,提示类风湿关节炎模型大鼠诱导成功;与模型组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、三痹汤低剂量组及雷公藤多苷组大鼠于初次致炎后第14、21、28、35天时关节炎指数评分显著降低(P<0.05);与三痹汤低剂量组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、雷公藤多苷组大鼠于初次致炎后第14、21、28、35天时关节炎指数评分显著降低(P<0.05);与雷公藤多苷组比较,三痹汤高剂量组大鼠于初次致炎后第21、28、35天时关节炎指数评分显著降低(P<0.0Talazoparib体内5),三痹汤中剂量组大鼠于初次致炎后第14、21、28、35天无明显差异。3.各组大鼠踝关节组织病理形态学变化:空白组大鼠滑膜细胞排列整齐,血管无扩张,间隙无异常,滑膜层细胞无增生,无炎性细胞浸润;模型组大鼠滑膜层细胞明显增多,排列紊乱,组织结构有破坏,增生严重,毛细血管扩张,重度血管翳形成,有大量炎性细胞浸润;三痹汤低剂量组大鼠滑膜细胞排列紊乱,滑膜层增厚减轻,毛细血管扩张,中度血管翳形成,有大量炎性细胞浸润;三痹汤中剂量组大鼠有轻度滑膜组织增生,有少量血管翳,少量炎性细胞浸润;三痹汤高剂量组大鼠有轻度滑膜组织增生,少量炎性细胞浸润;雷公藤多苷组大鼠滑膜细胞增厚,毛细血管扩张,少量炎性细胞浸润。4.各组大鼠血清中IL-6、IFN-γ含量变化:与空白组比较,模型组大鼠血清中IL-6、IFN-γ含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、三痹汤低剂量组和雷公藤多苷组大鼠血清中IL-6、IFN-γ含量显著降低(P<0.05);与三痹汤低剂量组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组和雷公藤多苷组大鼠血清中IL-6、IFN-γ含量显著降低(P<0.05);与雷公藤多苷组比较,三痹汤高剂量组大鼠血清中IL-6、IFN-γ含量显著降低(P<0.05),三痹汤中剂量组大鼠血清中含量变化无明显差异。5.各组大鼠滑膜组织中RORγt、STAT3、Foxp3的表达情况:与空白组比较,模型组大鼠滑膜组织中RORγt、STAT3表达水平显著升高(P<0.05),Foxp3表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,三痹汤高剂量组、三痹Baricitinib溶解度汤中剂量组、三痹汤低剂量组及雷公藤多苷组大鼠滑膜组织中RORγt、STAT3表达水平显著降低(P<0.05),Foxp3表达水平显著升高(P<0.05);与三痹汤低剂量组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、雷公藤多苷组大鼠滑膜组织中RORγt、STAT3表达水平显著降低(P<0.05),Foxp3表达水平显著升高(P<0.05);与雷公藤多苷组比较,三痹汤高剂量组大鼠滑膜组织中RORγt、STAT3表达水平显著降低(P<0.05),Foxp3表达水平显著升高(P<0.05),三痹汤中剂量组大鼠滑膜组织中表达水平无明显差异。6.各组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA表达情况:与空白组比较,模型组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、三痹汤低剂量组及雷公藤多苷组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA的表达显著降低(P<0.05);与三痹汤低剂量组比较,三痹汤高剂量组、三痹汤中剂量组、雷公藤多苷组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA的表达显著降低(P<0.05);与雷公藤多苷组比较,三痹汤高剂量组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA的表达显著降低(P<0.05),三痹汤中剂量组大鼠滑膜组织中STAT3 m RNA的表达无明显差异。结论:1.三痹汤可减轻类风湿关节炎模型大鼠踝关节的炎性细胞浸润,改善滑膜组织病理损伤,降低足容Hepatic functional reserve积和关节炎指数评分。2.三痹汤可能是通过抑制STAT3信号通路,调节RORγt和Foxp3表达水平,进而下调IL-6、IFN-γ含量,改善滑膜损伤。

过敏性鼻炎（AR）是临床常见且多发的呼吸道慢性疾病，一旦患病严重影响身心健康，有效药物的研发一直是AR研www.selleck.cn/products/PF-2341066究的热点和难点。西医通常采用抗组胺药、鼻喷激素、抗白三烯药物治疗AR，但容易产生耐药性和依赖性。中医则采用玉屏风颗粒等中成药结Caspase抑制剂合针灸、穴位按摩等中医特色疗法进行治疗，但见效慢。中西医结合能有效避免Novel inflammatory biomarkers单纯中医或西医治疗带来的诸多弊端，是目前治疗AR的首选，这其中，植物提取物的作用显得越发重要，并取得较多新的研究成果。笔者对AR致病机制研究进行了总结，并从植物分类、入药部位、提取方法、用药浓度、方剂组成、物质基础、作用机理等方面对单味药用植物提取物和多味植物组合提取物治疗AR进行了归纳，对研究中存在的问题进行了探讨和展望，以期为治疗AR植物制剂的开发提供参考。