目的:探讨一种新型的抗体药物偶联物Oba01对一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)吉非替尼敏感的非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞PC9、HCC827以及对吉非替尼耐药NSCLC细胞PC9GR、HCC827GR、H1975的杀伤效果及潜在机制。方法:1.通过细胞活力检测H1975、PC9、PC9GR、HCC827、HCC827GR对吉非替尼的敏感性以及Oba01对五种细胞的杀伤作用。2.使用流式细胞术检测吉非替尼或Oba01诱导上述五种细胞发生凋亡的能力。3.通过Western Blot检测吉非替尼或Oba01处理后,上述五种细胞中凋亡相关蛋白表达水平的变化。4.通过JC-1染色检测吉非替尼或Oba01处理后线粒体膜电位的改变。5.通过细胞活力检测凋亡抑制剂预处理后对Oba01对五种细胞杀伤作用的影响。6.通过Western Blot点击此处检测凋亡抑制剂预处理后对凋亡相关蛋白表达水平的影响。7.通过细胞活力检测PARP抑制剂BGB-290与Oba01联用后对上述五种细胞活力的影响。8.通过Western Blot检测BGB-290与Oba01联用对凋亡相关蛋白表达水平的影响。9.通过γH2AX免疫荧光染色检测BGB-290与Oba01联用后DNA损伤程度的变化。结果:1.PC9、PC9GR对吉非替尼的半数抑制浓度(50%inhibitory concent-ration,IC_(50))分别为0.044、29.270μM;HCC827、HCC827GR对吉非替尼的IC_(50)分别为0.101、27.100μM;H1975对吉非替尼的IC_(50)为27.904μM,表明通过构建获得的PC9GR、HCC827GR耐药细胞与H1975细胞均对吉非替尼耐药。Oba01对以上五种细胞均具有生长抑制作用。2.Oba01能够诱导以上五种细胞产生凋亡。3.Oba01干预细胞48小时后,五种细胞系与各对照组相比均产生了明显的凋亡,伴有凋亡相关蛋白的激活。4.与对照组相比,Oba01能够明显诱导五种细胞中DNA损伤相关蛋白PARP的切割程度与γH2AX的表达,使细胞产生DNA损伤。同时,Oba01也能诱导凋亡相关蛋白的激活,使细胞发生凋亡。5.Oba01可以降低五种细胞系的膜电位。6.加入凋亡抑制剂Emricasan预处理后,再加入Oba01,细胞活力并未明显下降。7.加入凋亡抑制剂Emricasan预处理后,能逆转Oba01对肺癌细胞的杀伤作用、凋亡相关蛋白和DNA损伤蛋白的激活作用。8.当Oba01与BGB-290联用时,对五种细胞系的杀伤效果增强,细胞活力相对于单药组也大幅下降。9.Oba01与BGB-290联用后,PARP的切割程度与γH2AX的表达水平表增加,凋亡相关蛋白的激活水平增加。10.Oba01与BGB-290联用后使细胞核内γH2AX的荧光强度显著增加。结论:Oba01通过诱导细胞凋亡对吉非替尼耐药的NSCLC细SAHA胞发挥杀伤作用,线粒体膜电位降低和DNHomogeneous mediatorA损伤可能参与上述机制。PARP抑制剂BGB-290与Oba01联用能显著增强对吉非替尼耐药NSCLC细胞的杀伤作用。